3、高效样品前处理优化
实验室主要对自然晒干仙草进行粉碎,液相样品中含有色素等其他物质,色谱酸含而根据苯甲酸性质,串联草及微溶于水、质谱易溶于乙醇、法测乙醚等有机溶剂,定仙因此实验室采用乙醇、其产乙酸乙酯、品中乙醚、苯甲乙腈几种实验室常用有机溶剂对样品进行提取,高效苯甲酸在电离状态下在水中溶解度较大,液相因此在样品中加入盐酸酸化样品,色谱酸含并加入氯化钠,串联草及降低苯甲酸在水相中的质谱溶解度,通过液液分配,达到对仙草中苯甲酸的提取。实验结果表明:乙醚提取效果最好。
用乙醚对能力验证样品、实验室质控样,检测结果满意(见表2)。
4、线性范围,检出限、定量限、回收率和精密度
标准溶液1000mg/L,用流动相稀释得到0.00、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mg/L浓度点配制的曲线点。按(1)色谱条件。色谱柱Shim-packGIST2.0mmI.D×150mmL,2.0μm;流动相A:0.2mmol/L乙酸铵水溶液,B:乙腈,等度洗脱(A/B=70/30);流速(0.4mL/min);柱温:40℃。进样量10μL。(2)质谱条件离子化模式。ESI(一);离子喷雾电压:4.5kV;雾化气:氮气3.0L/min;干燥气:氮气15L/min;碰撞气:氩气;DL温度:250℃;加热模块温度:400℃;扫描模式:多反应监测(MRM);驻留时间:20ms;延迟时间:3ms仪器条件以优化的最佳条件进样分析,以峰面积为纵坐标、质量浓度(μg/L)为横坐标画曲线。实验结果表明,目标物在0.1~2.0mg/L范围内线性关系良好,线性方程为y=173.49x+180.85,相关系数为0.9999。本研究通过配制0.05mg/L浓度点进样11次,得到11次进样标准偏差S=0.008,3×S为检出限,4倍检出限作为定量限,称样量1.09,本方法的检出限为0.025mg/kg,定量限为0.1mg/kg。
在两种不同产地仙草样品中分别添加0.1mg/L、0.5mg/L、1.5mg/L三个水平浓度目标物标准品,每个水平重复测试6次,进行回收率和精密度计算,平均回收率在90.0%~98.0%之间,相对标准偏差在(RSD)2.1%~4.6%之间,结果见(见表3)。
5、实际样品的检测
本研究建立的方法对仙草、仙草胶粉、凉粉罐头、仙草露等样品进行测试,几种仙草及其加工产品中均检出了苯甲酸,其中苯甲酸含量:仙草在7.52mg/kg~8.33mg/kg间,仙草胶粉50.4mg/kg,凉粉罐头2.60mg/kg,仙草露1.76mg/kg,(见表4)。苯甲酸标准品和仙草样品色谱图分别见图8、图9。
三、结论
本文采用乙醚作为萃取溶剂,在酸性条件下,液液萃取法提取仙草及其产品中苯甲酸的前处理技术,建立了仙草及其产品中苯甲酸含量的HPLC—MS/MS测定方法,该方法简单、灵敏、稳定,可满足仙草及其产品中苯甲酸含量的检测和确证。
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